Разница между конкурентным и неконкурентным методом ИФА

ключевое отличие между конкурентным и неконкурентным ИФА является то, что конкурентный ИФА использует антиген ингибирования, в то время как неконкурентный ИФА не использует антиген ингибирования для анализа.

Ферментно-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA) - это иммунологический анализ, который обнаруживает различные мишени, такие как антитела, антигены, белки и гликопротеины. Это быстрый и простой способ выполнения. Следовательно, это чаще используется в исследовательских и диагностических целях. ELISA предполагает использование ферментов и специфическое связывание антител и антигена. В зависимости от того, как происходят реакции, существует четыре типа ИФА: прямой ИФА, непрямой ИФА, сэндвич-ИФА и ингибирующий ИФА. Прямой, непрямой и сэндвич-ИФА являются типами неконкурентного ИФА, в то время как ингибирование ИФА является типом комплементарного ИФА. Основная цель этой статьи - обсудить разницу между конкурентным и неконкурентным методом ИФА..

СОДЕРЖАНИЕ

1. Обзор и основные отличия
2. Что такое конкурентный ИФА
3. Что такое неконкурентный ИФА
4. Сходства между конкурентным и неконкурентным ИФА
5. Сравнение бок о бок - конкурентный и неконкурентный ИФА в табличной форме
6. Резюме

Что такое конкурентный ИФА?

Конкурентный ИФА измеряет концентрацию антигена в образце путем обнаружения помех сигнала. Здесь в анализе используется ингибиторный антиген. Следовательно, это тип ингибирования ИФА. Во время этой процедуры антигены, присутствующие в образце, конкурируют с выбранным эталонным антигеном за связывание с определенным количеством меченого антитела. Кроме того, эта процедура начинается с инкубации образца с избыточным количеством меченого антитела. Кроме того, контрольный антиген должен быть предварительно нанесен на планшет для анализа с множеством лунок. Затем смесь образцов должна быть добавлена ​​в планшет для анализа, который содержит контрольный антиген. Свободные антитела будут связываться с контрольным антигеном в зависимости от количества антигена в образце. Следовательно, если присутствует больше образца антигена, будет обнаружено меньше эталонного антигена. Таким образом, он создает более слабый сигнал.

Рисунок 01: ИФА

Напротив, когда образец содержит меньшее количество антигена, все больше эталонного антигена будет занимать антитела и давать сильный сигнал. Поскольку конкурентный ИФА дает более сильный сигнал, когда образец содержит небольшое количество антигенов, конкурентный ИФА является очень чувствительным анализом, даже для образцов с небольшим количеством антигенов..

В некоторых конкурентных наборах для ELISA меченый антиген используется вместо меченого антитела. Здесь меченый антиген и образец антигена будут конкурировать за связывание с первичным антителом. Точно так же, когда количество антигена в образце низкое, количество меченого антигена, который связывается с антителами, будет выше и создаст более сильный сигнал.

Что такое неконкурентный ИФА?

Среди четырех типов ИФА, три типа неконкурентного ИФА. Это прямой ИФА, непрямой ИФА и сэндвич-ИФА. Все три формата работают по общему принципу ELISA с небольшими различиями в методологиях..

Прямой ИФА использует фермент меченого первичного антитела. Следовательно, оно не требует вторичного антитела. Поэтому прямой ИФА быстрее, чем другие типы ИФА. Первичное антитело будет напрямую связываться с иммобилизованным антигеном-мишенью, который присутствует в планшете. Следовательно, реакция фермент-субстрат будет иметь место, производя видимый сигнал.

Рисунок 02: Сэндвич-ИФА

В отличие от прямого ИФА, непрямой ИФА использует немеченое первичное антитело и фермент, меченный вторичным антителом. Как только первичное антитело связывается с иммобилизованным антигеном, вторичное антитело связывается с первичным антителом. Фермент во вторичном антителе будет реагировать с антигеном и производить видимый сигнал. Сэндвич-ИФА отличается как прямым, так и непрямым ИФА. Здесь антитело иммобилизовано на стенке планшета для анализа.

Каковы сходства между конкурентным и неконкурентным методом ИФА?

• Конкурентный и неконкурентный ИФА - это два типа методов иммуносорбентного анализа..
• Они очень гибкие и чувствительные методы.
• Кроме того, как конкурентный, так и неконкурентный ИФА являются иммуноферментными анализами..
• Кроме того, оба метода генерируют сигнал из-за реакции фермент-субстрат..

В чем разница между конкурентным и неконкурентным методом ИФА?

Конкурентный ИФА - это тип ИФА, который основан на завершении между анализируемым антигеном и меченым антигеном для ограниченного количества специфического антитела. С другой стороны, не существует такой конкуренции между интересующим антигеном и контрольным антигеном в неконкурентном ИФА. Таким образом, это ключевое различие между конкурентным и неконкурентным ИФА. Аналогично, конкурентный ELISA представляет собой ELISA ингибирования, тогда как неконкурентный ELISA не является ELISA ингибирования. Таким образом, это также разница между конкурентным и неконкурентным ИФА.

Кроме того, конкурентный ИФА является более подходящим для измерения низкого количества интересующего антигена. Это чувствительный метод. С другой стороны, неконкурентный ИФА не зависит от количества антигенов, присутствующих в образце. Таким образом, это также разница между конкурентным и неконкурентным ИФА.

Ниже инфографика сравнительно объясняет разницу между конкурентным и неконкурентным методом ИФА.

Резюме - конкурентный и неконкурентный ИФА

Конкурентный и неконкурентный ИФА - это два основных типа ИФА или иммуноферментных анализов. Суммируя разницу между конкурентным и неконкурентным ELISA, конкурентный ELISA опирается на конкуренцию между интересующим антигеном и эталонным антигеном по отношению к ограниченному количеству антител. Поэтому конкурентный ИФА также называют ингибирующим ИФА. С другой стороны, неконкурентный ИФА не зависит от конкуренции между целевыми антигенами и контрольными антигенами. Он использует избыток меченого специфического антитела к интересующему аналиту. Таким образом, это ключевое различие между конкурентным и неконкурентным ИФА. Прямой ИФА, непрямой ИФА и сэндвич-ИФА - это три основных типа неконкурентного ИФА.

Ссылка:

1. Био-Рад. «Типы ИФА | Bio-Rad «. Био, доступно здесь.
2. «Четыре типа ИФА». Cusabio Life Science - Ваш научный партнер по биологии, доступен здесь.

Изображение предоставлено:

«Elisa tipus» Carolfv333 - собственная работа (CC BY-SA 4.0).
«Сэндвич-иммуноанализ, ELISA» NickCT - собственная работа (CC BY-SA 3.0) через Commons Wikimedia