Разница между прямой и непрямой иммунофлюоресценцией

ключевое отличие между прямой и непрямой иммунофлюоресценцией является то, что прямая иммунофлуоресценция использует одно антитело, которое работает против интересующей мишени, в то время как косвенная иммунофлюоресценция использует два антитела для маркировки интересующей мишени.

Иммунофлуоресценция или визуализация клеток - это метод, который используется для маркировки конкретного антигена-мишени флуорофором. Здесь флуорофор представляет собой флуоресцентное химическое соединение, которое может повторно излучать свет при возбуждении света. Когда флуорофор связывается с антигеном-мишенью, это позволяет обнаружить молекулу-мишень в образце. Чтобы описать это далее, когда антиген связывается со специфическим антителом, он может быть конъюгирован с флуорофорами. Следовательно, легко обнаружить присутствие антигена-мишени в образце при наблюдении под флуоресцентным микроскопом.

Кроме того, существует два типа иммунофлюоресценции; прямая и непрямая иммунофлюоресценция. Разница между прямой и непрямой иммунофлюоресценцией в основном заключается в количестве используемых антител и конъюгации флуорофора. То есть при прямой иммунофлюоресценции флуорофор непосредственно конъюгирует с первичным антителом, тогда как при непрямой иммунофлюоресценции флуорофор конъюгат с вторичным антителом.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Обзор и основные отличия
2. Что такое прямая иммунофлюоресценция
3. Что такое косвенная иммунофлюоресценция
4. Сходство между прямой и непрямой иммунофлюоресценцией
5. Сравнение бок о бок - прямая и косвенная иммунофлюоресценция в форме таблицы
6. Резюме

Что такое прямая иммунофлюоресценция?

Иммунофлуоресценция использует антитела для обнаружения специфических антигенов-мишеней. Прямая иммунофлюоресценция является одним из двух типов иммунофлуоресценции. В прямой иммунофлюоресценции участвует одно антитело (первичное антитело), ​​и флуорофор непосредственно конъюгирует с первичным антителом. При связывании антитела с антигеном-мишенью флуорофор излучает флуоресценцию, которую можно обнаружить с помощью флуоресцентного микроскопа.

Рисунок 01: Прямая иммунофлюоресценция

Однако прямая иммунофлуоресценция является дорогостоящим методом, поскольку первичные конъюгированные антитела являются дорогостоящими по сравнению со вторичными антителами. Тем не менее, он не включает в себя дополнительный шаг, следовательно, более короткий метод. Кроме того, неспецифические связывания уменьшаются при прямой иммунофлюоресценции. Следовательно, перекрестная реактивность видов низкая. Но при обнаружении чувствительность прямой иммунофлюоресценции слабая по сравнению с косвенной иммунофлуоресценцией .

Что такое косвенная иммунофлюоресценция?

Непрямая иммунофлуоресценция является вторым типом иммунофлуоресценции, который включает два типа антител, таких как первичные и вторичные антитела, в метке целевого антигена. В этом методе флуорофор конъюгирует со вторичным антителом. Следовательно, этот метод включает в себя дополнительный шаг.

Рисунок 02: Иммунофлуоресценция

Однако чувствительность в этом методе высока, поскольку несколько флуорофоров могут быть конъюгированы с вторичными антителами, и это облегчает обнаружение. Кроме того, непрямая иммунофлуоресценция является менее дорогой из-за того, что конъюгация вторичных антител является менее дорогой и более простой. По сравнению с прямой иммунофлюоресценцией перекрестная реактивность видов высока в косвенном методе.

Каковы сходства между прямой и непрямой иммунофлюоресценцией?

• Это два типа техники иммунофлюоресценции.
• Первичные антитела и флуорофор участвуют в обоих методах.
• Также реакция антиген-антитело происходит в обоих методах.
• Кроме того, как прямая, так и непрямая иммунофлуоресценция используют флуоресцентный микроскоп для обнаружения антигена.

В чем разница между прямой и непрямой иммунофлюоресценцией?

Иммунофлуоресценция может быть прямой или непрямой в зависимости от конъюгации флуорофора с используемыми антителами. При прямой иммунофлюоресценции флуорофор конъюгирует с первичным антителом, которое является единственным антителом, которое участвует в этой методике. В противоположность этому, при непрямой иммунофлюоресценции флуорофор конъюгирует со вторичным антителом, которое является одним из двух типов антител, которые участвуют в методике. Следовательно, основное различие между прямой и непрямой иммунофлюоресценцией заключается в типе антител, которые конъюгируют с флуорофором..

Следующая инфографика обеспечивает параллельное сравнение различий между прямой и непрямой иммунофлюоресценцией.

Резюме - Прямая против косвенной иммунофлюоресценции

Иммунофлуоресценция - это метод, который используется для обнаружения наличия специфических антигенов в образце. Этот метод использует специфические антитела. Следовательно, при этом антитела конъюгируют с флуорофорами для обнаружения их с помощью флуоресцентного микроскопа. Кроме того, существует два типа иммунофлуоресценции, а именно, прямая и непрямая иммунофлюоресценция. Прямая иммунофлуоресценция включает одно антитело и флуорофор, непосредственно конъюгированный с этим антителом. Косвенная иммунофлюоресценция включает два антитела; первичный и вторичный и флуорофор конъюгированный со вторичным антителом. Поскольку несколько вторичных антител могут связываться с первичным антителом, а несколько флуорофоров могут конъюгировать со вторичными антителами, косвенная иммунофлуоресценция является более чувствительным методом, чем прямой метод. Кроме того, косвенный метод дешевле, чем прямой. Таким образом, это разница между прямой и непрямой иммунофлюоресценцией.

Ссылка:

1. «Иммунофлуоресценция.» Википедия, Фонд Викимедиа, 19 августа 2018 г. Доступно здесь 

Изображение предоставлено:

1. «HSP IF IgA» Эммануэльм из en.wikipedia (CC BY 3.0) через Commons Wikimedia
2. «Иммунофлуоресценция». Westhayl618 - собственная работа (CC BY-SA 4.0) через Commons Wikimedia.