Разница между иммунофлуоресценцией и иммуногистохимией

Ключевое отличие - иммунофлюоресценция против иммуногистохимии
 

Диагностика заболеваний, в которой используются молекулярно-биологические методы, стала новой областью клинических лабораторных технологий. Он включает в себя все тесты и методы для выявления заболевания и понимания причины заболевания путем анализа ДНК, РНК или экспрессированных белков в организме. Быстрый прогресс в молекулярной диагностике позволил провести фундаментальные исследования по инфекционным и неинфекционным заболеваниям. Они используются для определения изменений в последовательности или уровнях экспрессии в критических генах или белках, вовлеченных в заболевание. Иммунофлуоресценция (IF) и иммуногистохимия (IHC) - два таких широко используемых метода в биологии рака.. IF - это тип IHC, в котором метод обнаружения флуоресценции используется для анализа моноклональных и поликлональных антител, тогда как IHC использует химические методы для обнаружения моноклональных и поликлональных антител.. В этом ключевое отличие IF и IHC.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Обзор и основные отличия
2. Что такое иммунофлуоресценция 
3. Что такое иммуногистохимия
4. Сходство между иммунофлуоресценцией и иммуногистохимией
5. Сравнение бок о бок - иммунофлюоресценция и иммуногистохимия в табличной форме
6. Резюме

Что такое иммунофлуоресценция (IF)?

Иммунофлуоресценция - это метод обнаружения, при котором антитела, используемые в анализе, помечаются с использованием флуоресцентных красителей или флуоресцентных белков для целей обнаружения. Меченые вторичные антитела могут приводить к нежелательным фоновым сигналам; следовательно, метод IF основан на маркировке самого первичного антитела в настоящее время, чтобы избежать нежелательных сигналов во время обнаружения. Посредством этого метода предотвращается неспецифическое связывание между первичным и вторичным антителом, и оно происходит быстрее, так как в этом случае не происходит вторичной стадии инкубации. Качество данных также улучшается.

Рисунок 01: Двойное иммунофлуоресцентное окрашивание для BrdU, NeuN и GFAP

Флуорохромы или флуоресцентные красители представляют собой соединения, которые могут поглощать излучение, предпочтительно ультрафиолетовое излучение, которое возбуждается. Когда частицы достигают основного состояния из возбужденного состояния, они испускают излучение, которое захватывается и детектируется детектором для формирования спектра. Очень важно, чтобы флуоресцентная метка была совместимой и стабильной для конкретной реакции, и она должна быть правильно конъюгирована с антителом для получения точных результатов. Одним из наиболее часто используемых флуорохромов является изотиоцианат флуоресцеина (FITC) зеленого цвета с длинами волн пиков поглощения и излучения 490 нм и 520 нм соответственно. Родамин, другой агент, используемый в IF, имеет красный цвет и имеет отчетливые длины волн пиков поглощения и излучения 553 нм и 627 нм..

Что такое иммуногистохимия (IHC)?

IHC - это метод молекулярного тестирования, применяемый для выявления и подтверждения наличия антигена в клетке-мишени. Клеткой-мишенью может быть инфекционная частица, микробный патоген или клетка злокачественной опухоли. IHC использует моноклональные и поликлональные антитела для определения присутствия антигенов, присутствующих на клеточной поверхности клеток-мишеней. Методика основана на связывании антиген-антитело. Маркер обнаружения конъюгируют с этими антителами для обнаружения наличия или отсутствия конкретного антигена. Эти маркеры могут быть химическими маркерами, такими как ферменты, флуоресцентно меченные антитела или радиомеченые антитела..

Рисунок 02: Срез мозга мыши, окрашенный иммуногистохимией

Наиболее популярное применение IHC в биологии раковых клеток для выявления наличия злокачественных опухолей, но оно также используется для выявления инфекционных заболеваний.

Каковы сходства между иммунофлуоресценцией и иммуногистохимией?

• Иммунофлуоресценция и иммуногистохимия происходят в условиях in vitro..
• Обе методики основаны на антигене-антителе
• Оба очень быстрые методы.
• Результаты методик воспроизводимы.
• Оба улучшили качество данных.
• Эти методы используются в диагностике рака и инфекционных заболеваний..

В чем разница между иммунофлуоресценцией и иммуногистохимией?

Иммунофлуоресценция против иммуногистохимии
IF - это метод обнаружения, при котором антитела, используемые в анализе, помечаются с использованием флуоресцентных красителей или флуоресцентных белков для обнаружения.	IHC - это метод обнаружения, при котором антитела, используемые в анализе, маркируются с использованием химических веществ или радиоактивных элементов для обнаружения..
точность
Точность в методике IF выше, чем в IHC.	Точность ниже в IHC.
специфичность
Если более конкретно.	IHC менее конкретен.

Резюме - Иммунофлуоресценция против иммуногистохимии

Молекулярные механизмы привели ко многим изменениям в области медицины, породив передовые методы молекулярного тестирования, которые привели к революциям в области диагностики. Эти изобретения привели к быстрой и точной идентификации и подтверждению заболевания, что позволило обеспечить успешное введение и производство лекарств. Эти методы также используются в фармакологии для определения целей лекарств и для подтверждения фармакокинетических свойств препарата во время метаболизма лекарств. IF и IHC представляют собой два диагностических метода, которые основаны на концепции связывания антигена и антитела, хотя способы обнаружения в обеих методиках различаются. IF использует принцип флуоресценции для обнаружения антигена, а IHC использует концепцию химической конъюгации для обнаружения антигена. В этом разница между IF и IHC.

Скачать PDF-версию Иммунофлуоресценции против Иммуногистохимии

Вы можете скачать PDF версию этой статьи и использовать ее в автономном режиме, как указано в примечании. Пожалуйста, загрузите PDF версию здесь. Разница между иммунофлуоресценцией и иммуногистохимией.

Ссылки:

1. Аоки, Валерия и др. «Прямая и непрямая иммунофлюоресценция». Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, доступно здесь. Доступ 25 августа 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. «Применение иммуногистохимии». Журнал «Фармация и биологические науки», Medknow Publications & Media Pvt Ltd, август 2012 г., доступно здесь. Доступ 25 августа 2017.

Изображение предоставлено:

1. «Двойное иммунофлуоресцентное окрашивание для BrdU, NeuN и GFAP» Ма М, Ма Y, Yi X, Го R, Чжу W, Фан X, Xu G, Фрей WH 2, Лю X. - Интраназальная доставка трансформирующего фактора роста бета1 у мышей после инсульта уменьшает объем инфаркта и увеличивает нейрогенез в субвентрикулярной зоне; PMID 19077183 (CC BY 2.0) с помощью Wikimedia Commons
2. «Гипоталамус мышиной ткани, окрашенной ABC-Immunohistochemistry» Заббн - собственная работа (CC BY-SA 3.0) через Commons Wikimedia