Разница между северным, южным и западным блоттингом

Ключевая разница - Северный против Южного против Западного блоттинга
 

Обнаружение специфических последовательностей ДНК, РНК и белков имеет важное значение для различных типов исследований в молекулярной биологии. Гель-электрофорез - это метод, который разделяет ДНК, РНК и белки в соответствии с их размерами. Из профилей геля определенная последовательность ДНК, последовательность РНК или белок обнаруживаются с помощью специальных методов, называемых блоттингом и гибридизацией с мечеными зондами. Есть три различных типа блоттинга, а именно: южный, северный и западный. Ключевое различие между северным, южным и западным блоттингом заключается в типе молекулы, которую он обнаруживает в образце.. Саузерн-блоттинг - это метод, который обнаруживает определенную последовательность ДНК из образца ДНК. Нозерн-блоттинг - это метод, который обнаруживает определенную последовательность РНК из образца РНК. Вестерн-блоттинг - это метод, который обнаруживает определенный белок из образца белка.

СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое Саузерн Блоттинг?
3. Что такое Северный блоттинг
4. Что такое вестерн-блоттинг
5. Сравнение бок о бок - Северный против Южного против Западного блоттинга
6. Резюме

Что такое Саузерн Блоттинг??

Метод саузерн-блоттинга был разработан Э. М. Саузерном в 1975 году для идентификации специфической последовательности ДНК из образца ДНК. Это первый метод блоттинга, введенный в молекулярной биологии. Это позволило обнаружить специфические гены из ДНК, специфические фрагменты из ДНК и т. Д. В методе саузерн-блоттинга есть несколько этапов. Они следующие.

1. ДНК выделяют из образца и расщепляют эндонуклеазами рестрикции..
2. Переваренный образец отделяют электрофорезом в агарозном геле.
3. Фрагменты ДНК в геле денатурируют в одну нить с помощью щелочного раствора.
4. Одноцепочечная ДНК переносится на нитроцеллюлозную фильтрующую мембрану путем капиллярного переноса.
5. Переносимая ДНК постоянно фиксируется на мембране.
6. Фиксированная ДНК на мембране гибридизуется с мечеными зондами.
7. Несвязанную ДНК смывают с мембраны промывкой.
8. Рентгеновская пленка подвергается воздействию мембраны и готовится авторадиограф.

Саузерн-блоттинг применяется для различных аспектов молекулярной биологии. Он полезен при картировании RFLP, судебно-медицинских исследованиях, метилировании ДНК при экспрессии генов, обнаружении мутантных генов при генетических нарушениях, дактилоскопии ДНК и т. Д..

Рисунок 01: Техника Саузерн Блоттинга

Что такое Северный блоттинг?

Нозерн-блоттинг - это метод, разработанный для обнаружения определенной последовательности РНК или последовательности мРНК из образца для изучения экспрессии генов. Этот метод был разработан Алвином, Кемпом и Старком в 1979 году. Он отличается от методов южной и западной блоттинга несколькими этапами. Однако этот метод также выполняется с помощью гель-электрофореза, блоттинга и гибридизации со специфическими мечеными зондами и детектированием. Техника северного блоттинга выполняется следующим образом.

1. РНК извлекается из образца и отделяется гель-электрофорезом.
2. РНК переносится с геля на промокательную мембрану и фиксируется.
3. Мембрану обрабатывают меченым зондом, приготовленным из кДНК или РНК (зонд является комплементарным определенной последовательности в образце).
4. Зонд инкубируется с мембраной для связывания с определенной последовательностью.
5. Несвязанные зонды смываются.
6. Гибридизированные фрагменты обнаруживаются авторадиографом.

Нозерн-блоттинг является важным инструментом для обнаружения и количественного определения гибридизованной мРНК, изучения деградации РНК, оценки периода полураспада РНК, обнаружения сплайсинга РНК, изучения экспрессии генов и т. Д..

Рисунок 02: Северное блоттинг

Что такое вестерн-блоттинг?

Вестерн-блоттинг - это метод обнаружения специфического белка из белковой смеси с использованием меченого антитела. Поэтому вестерн-блот также известен как иммуноблот. Эта техника была представлена ​​Towbin и другие в 1979 году, и сейчас он регулярно проводится в лабораториях для анализа белка. Шаги следующие.

1. Белки извлекаются из образца
2. Белки разделяют по размерам с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.
3. Отделенные молекулы переносятся в мембрану PVDF или нитроцеллюлозную мембрану путем электропорации
4. Мембрана блокирована для неспецифического связывания с антителами
5. Переносимые белки связаны с первичным антителом (антителами, меченными ферментом).
6. Мембрана промывается для удаления неспецифически связанных первичных антител
7. Связанные антитела обнаруживаются путем добавления субстрата и обнаружения образовавшегося окрашенного осадка

Вестерн-блоттинг полезен при обнаружении антител против ВИЧ в образце сыворотки человека. Вестерн-блот также можно использовать в качестве подтверждающего теста на инфекцию гепатита В и окончательного теста на коровье бешенство.

Рисунок 03: Вестерн-блоттинг

В чем разница между северным, южным и западным блоттингом??

Северный против Южного против Западного блоттинга
Тип обнаруженной молекулы
Северное пятно	Нозерн-блоттинг обнаруживает определенную последовательность РНК из образца РНК.
Саузерн-блоттинг	Саузерн-блоттинг обнаруживает определенную последовательность ДНК из образца ДНК.
Вестерн-блоттинг	Вестерн-блоттинг обнаруживает специфический белок из образца белка.
Тип геля
Северное пятно	Это использует агарозу / формальдегидный гель.
Саузерн-блоттинг	Это использует агарозный гель.
Вестерн-блоттинг	Это использует полиакриламидный гель.
Метод промокания
Северное пятно	Это капиллярный перенос.
Саузерн-блоттинг	Это капиллярный перенос.
Вестерн-блоттинг	Это электрический перевод.
Используемые зонды
Северное пятно	зонды кДНК или РНК, меченные радиоактивно или нерадиоактивно.
Саузерн-блоттинг	ДНК-зонды маркированы радиоактивно или нерадиоактивно.
Вестерн-блоттинг	Первичные антитела используются в качестве зондов.
Система обнаружения
Северное пятно	Это делается с помощью авторадиографии, или обнаружения света или изменения цвета.
Саузерн-блоттинг	Это делается с помощью авторадиографии, обнаружения света или изменения цвета.
Вестерн-блоттинг	Это делается с помощью обнаружения света или изменения цвета.

Резюме - Северный против Южного против Западного блоттинга

Блоттинг - это специальная методика, разработанная для идентификации конкретной ДНК, РНК или белка из образцов. Существует три отдельных процедуры блоттинга, а именно северная, южная и западная, для обнаружения молекулы определенного типа. Техника Нозерн-блоттинга предназначена для обнаружения определенной последовательности РНК из смеси РНК. Метод саузерн-блоттинга позволяет обнаружить определенную последовательность ДНК из образца ДНК, а метод вестерн-блоттинга разработан для идентификации конкретного белка из белковой смеси..

Ссылки
1. Гиббонс, Джанэй. «Вестерн-блот: обзор переноса белка». Североамериканский журнал медицинских наук. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, март 2014 г. Интернет. 27 марта 2017
2. Браун Т. «Южное блоттинг». Современные протоколы в иммунологии. Национальная медицинская библиотека США, май 2001 г. Интернет. 27 марта 2017
3. Он, Шан Л. «Северное пятно». Методы энзимологии. Национальная медицинская библиотека США, 2013. Веб. 27 марта 2017

Изображение предоставлено:
1. «Схема северного блоттинга» RNA405 - собственная работа (общественное достояние) через Commons Wikimedia
2. «Вестерн-блот 114А» от Amanthabagdon - собственная работа (общественное достояние) через Commons Wikimedia