Разница между теплой и холодной трипсинизацией
Share
Ключевая разница - теплый против Холодный трипсин
Теплая и холодная трипсинизация являются двумя методами, используемыми в ферментативной дезагрегации клеток при культивировании клеток животных. ключевое отличие между теплой и холодной трипсинизацией, как следует из названия, зависит от температуры, при которой добавляется трипсин для дезагрегации клеток. Теплая трипсинизация происходит в условиях повышенной температуры (36,5 - 37). 0В) тогда как холодная трипсинизация происходит в условиях низких температур.
В процессе первичного культивирования клеток животных используются три основных метода, которые оказались успешными. Три метода включают механическую дезагрегацию клеток, ферментативную дезагрегацию клеток и метод первичной эксплантации. Ферментативная дезагрегация клеток приводит к выделению клеток, и это осуществляется с помощью протеин-разрушающего фермента трипсина. Поэтому этот процесс известен как трипсинизация. Трипсинизацию можно проводить в двух разных условиях, а именно: теплая трипсинизация и холодная трипсинизация. Теплая трипсинизация - это метод обработки клеток трипсином в теплых условиях при температуре 36,5 - 37. 0C. Холодная трипсинизация - это процесс обработки трипсином, который происходит в более холодных условиях, предпочтительно на льду, поддерживающем очень низкие температуры..
СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое теплая трипсинизация
3. Что такое холодная трипсинизация
4. Сходство между теплой и холодной трипсинизацией
5. Сравнение бок о бок - теплая и холодная трипсинизация в табличной форме
6. Резюме
Что такое теплая трипсинизация?
Трипсинизация может быть проведена для дезагрегации клеточных компонентов с целью выделения клеток для получения первичной клеточной культуры. Трипсин является ферментом распада белка, а смесь ферментов, используемая при трипсинизации, может представлять собой неочищенный экстракт или очищенный продукт. Говорят, что неочищенный экстракт более эффективен при лизисе белка и дезинтеграции клеток, так как содержит другие деградирующие ферменты..
Теплая трипсинизация является наиболее часто используемым ферментативным методом дезагрегации клеток, который происходит в условиях более высоких температур. Перед обработкой трипсинизацией нужную ткань нарезают на более мелкие кусочки. Это облегчает легкий процесс дезагрегации. Затем измельченную ткань промывают в специальной среде, известной как среда Dissection Basal Salt..
По завершении этапа промывания клетки превращаются в колбу, содержащую активный фермент, которым является трипсин. Поскольку этот метод подразумевает теплый протокол трипсинизации, трипсин помещается при температуре около 37 0С около четырех часов.
Рисунок 01: Трипсин
Содержимое смешивают и перемешивают с использованием методов центрифугирования для простоты протокола и ускорения процесса дезагрегации. Как только рекомендуемое время достигнуто, клетки могут быть получены из супернатанта. Затем клетки, полученные из супернатанта, инкубируют при определенной температуре и времени.
Что такое холодная трипсинизация?
Холодная трипсинизация - это другой тип трипсинизации, который происходит в холодных условиях. По этой методике клетки, которые нарезаны и промыты, помещаются во флаконы на лед и затем пропитываются трипсином. Период замачивания значительно дольше - около 6-24 часов..
После завершения процедуры замачивания трипсин удаляется из клеточного лизата, а кусочки ткани дополнительно инкубируются при 37 ° С. 0С около 20 - 30 минут. Дезагрегация клеток вызвана повторным пипетированием тканевой смеси. Это позволит клеткам отделиться от мембраны и попасть в супернатант. Как только клетки находятся в супернатанте, их инкубируют и выращивают при желаемой температуре и периоде времени.
Метод холодной трипсинизации имеет несколько преимуществ
- Более высокий выход жизнеспособных клеток, поскольку повреждение клеток сводится к минимуму. Повреждение клеток сводится к минимуму, если не использовать этапы центрифугирования.
- Весьма удобный метод.
- Менее трудоемкий.
Основным ограничением метода холодной трипсинизации является то, что большие количества не могут быть использованы в одном случае.
Каковы сходства между теплой и холодной трипсинизацией?
- И теплый, и холодный процессы трипсинизации используют фермент трипсин для дезагрегации клеток..
- Как теплый, так и холодный процессы трипсинизации используются в процедурах культивирования клеток для дезагрегации клеток..
- В процедурах лечения как теплой, так и холодной трипсинизацией клетки получают из супернатанта.
В чем разница между теплой и холодной трипсинизацией?
Теплый против холодной трипсинизации | |
| Теплая трипсинизация - это метод обработки клеток трипсином в теплых условиях при температуре 36,5 - 37. 0. | Холодная трипсинизация - это процесс обработки трипсином, который происходит в более холодных условиях, предпочтительно на льду, поддерживающем очень низкие температуры.. |
| протокол | |
| Нарезанные кусочки ткани поддерживают при 37 0С непрерывно на протяжении всей процедуры. | Измельченные кусочки ткани сначала выдерживают при ледяных температурах, а затем поддерживают при 37 0. |
| температура | |
| Теплая трипсинизация происходит в 36,5 - 37 0 | Холодная трипсинизация происходит при ледяных температурах. |
| Время, потраченное | |
| Меньшее время, необходимое для всего процесса (около 4 часов) теплой трипсинизации. | Для холодной трипсинизации требуется больше времени (около 6-24 часов). |
| Выход жизнеспособных клеток | |
| Низкая теплая трипсинизация. | Высоко в холодной трипсинизации. |
| Использование центрифугирования | |
| Центрифугирование необходимо для дезагрегации клеток при теплой трипсинизации. | Центрифугирование не требуется при холодной трипсинизации. |
| Начальное количество ткани для трипсинизации | |
| Большее количество ткани можно использовать при теплой трипсинизации. | Меньшее количество ткани можно использовать при холодной трипсинизации. |
| Повреждение клетки | |
| Высокая благодаря центрифугированию при теплой трипсинизации. | Меньше из-за холодной трипсинизации. |
Резюме - Тепло против Холодный трипсин
Трипсинизация - это метод использования расщепляющего белок фермента трипсина для дезагрегации и приготовления первичных клеточных культур в процессе культивирования клеток. Существует два основных метода трипсинизации, основанных на температурах, используемых во время процедуры. Они теплые и холодные трипсинизации. Теплая трипсинизация проводится в 37 0C, тогда как холодная трипсинизация проводится в ледяных условиях. Хотя холодная трипсинизация занимает больше времени для завершения, говорят, что она имеет более высокий выход жизнеспособных клеток. Это связано с тем, что повреждение клеток сводится к минимуму при холодной трипсинизации, поскольку в нем не используются активные стадии центрифугирования. В этом разница между теплой и холодной трипсинизацией.
Ссылка:
1. «трипсин.» Трипсинизация - обзор | Темы ScienceDirect. Доступна здесь
2. «Первичная клеточная культура: 3 метода (с диаграммой)». Дискуссия по биологии, 16 октября 2015 г. Доступно здесь
Изображение предоставлено:
1. «Активный сайт трипсина», Фдардель - собственная работа (CC BY-SA 3.0) через Commons Wikimedia
