Разница между клонированием и субклонированием

Ключевая разница - клонирование против субклонирования
 

Клонирование и субклонирование представляют собой молекулярно-биологические процедуры, которые создают генетически идентичные клетки или организмы, несущие интересующую ДНК или ген. Клонирование - это метод, который включает в себя вставку интересующего гена или ДНК в вектор, его репликацию в пределах бактерии-хозяина и получение клеток или организмов, которые являются точными копиями генетической структуры. Субклонирование - это метод, который включает вставку представляющего интерес гена, который уже встроен в вектор, во вторичный вектор, его репликацию в бактерии-хозяине и получение генетически идентичных копий клеток или организмов. Основное различие между клонированием и субклонированием заключается в том, что, при клонировании интересующий ген, после лигирования в вектор, продолжает процесс клонирования, в то время как при субклонировании интересующий уже клонированный ген отделяется от родительского вектора и снова вставляется в вектор-реципиент и продолжает процесс.

СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое клонирование
3. Что такое субклонирование
4. Сравнение бок о бок - клонирование и субклонирование
5. Резюме

Что такое клонирование?

Клонирование - это процедура, которая производит генетически идентичные организмы или клетки. В природе клонирование происходит посредством бесполого размножения. Когда нет генетической рекомбинации или изменения, дочерние клетки получают тот же генетический состав родителя. Прокариотические и эукариотические организмы создают клоны путем деления, зародышей, митозов и т. Д. В молекулярной биологии клонирование генов или специфических фрагментов ДНК является популярным методом изучения структуры и функции этого конкретного участка ДНК..

Основная цель молекулярного клонирования - сделать миллионы копий генетически идентичных клеток или организмов, несущих интересующий фрагмент ДНК (в основном, гены). Создает организмы с точными генетическими копиями другого. Прежде всего, специфические гены клонируются в молекулярных исследованиях для получения структурной и функциональной информации и для секвенирования ДНК. Также для производства специфических белков или продуктов в больших масштабах широко используется клонирование..

Процедура клонирования

Основные этапы процедуры клонирования заключаются в следующем.

1. Идентификация и выделение гена интереса. (Амплификация гена интереса с помощью ПЦР).
2. Рестриктивное расщепление представляющего интерес гена (рестрикционная эндонуклеаза режет ген).
3. Рестрикция переваривания векторной ДНК. (Векторная ДНК также разрезается с использованием той же эндонуклеазы рестрикции).
4. Вставка гена в вектор и образование рекомбинантной молекулы.
5. Трансформация рекомбинантного вектора в бактерию-хозяина.
6. Выделение и идентификация трансформированных бактерий (плазмидный вектор должен содержать селектируемый ген, чаще всего ген устойчивости к антибиотикам для скрининга трансформированных бактерий).
7. Экспрессия рекомбинантного гена в хозяине.

Figure_01: Процедура клонирования

Что такое субклонирование?

Субклонирование - это процедура перемещения интересующего гена из одного вектора в другой вектор, чтобы увидеть экспрессию гена, чтобы получить желаемую функциональность гена. В этом методе участвуют два вектора; а именно, родительский вектор и вектор назначения. Клонированные вставки снова перемещаются во второй вектор в субклонировании. Цель переноса гена из первого вектора во второй вектор состоит в том, чтобы получить что-то, что не могло быть сделано первым вектором, или снова отделить ген в уже клонированном фрагменте ДНК и экспрессировать его в одиночку. Рестрикционные ферменты используются в этой процедуре в начале.

Процедура субклонирования

Основные этапы субклонирования заключаются в следующем.

1. С помощью эндонуклеаз рестрикции выделение представляющей интерес ДНК в донорной плазмиде (родительском векторе).
2. Амплификация интересующей ДНК с помощью ПЦР.
3. Очистка продукта ПЦР (представляющей интерес ДНК) с помощью гель-электрофореза.
4. Открытие реципиентной плазмиды теми же эндонуклеазами рестрикции, которые используются для отделения представляющей интерес ДНК в исходной плазмиде.
5. Лигирование представляющей интерес ДНК (гена) в реципиентную плазмиду для создания субклонированной плазмиды.
6. Трансформация субклонированного вектора в компетентную бактерию-хозяина.
7. Скрининг трансформированных клеток.
8. Очистка плазмидной ДНК и использование для секвенирования ДНК или экспрессии генов для получения желаемых продуктов.

Субклонирование проводят в случаях выделения одного гена из клонированной группы генов или когда требуется, чтобы интересующий ген был перенесен в полезную плазмиду, чтобы увидеть точную функцию интересующего гена..

Figure_02: Процедура субклонирования

В чем разница между клонированием и субклонированием?

Клонирование против субклонирования
Клонирование - это процедура, которая производит генетически идентичные организмы или клетки..	Субклонирование - это процедура перемещения интересующего гена из одного вектора в другой вектор, чтобы увидеть экспрессию гена, чтобы получить желаемую функциональность гена.
Процесс
Отделите интересующую ДНК от организма и вставьте в вектор один раз и клонируйте	Уже клонированную ДНК отделяют от первого вектора и вставляют во второй вектор и клонируют.
Вставить движение через векторы
Не перемещает вставки (представляющую интерес ДНК) из одного вектора в другой вектор.	Переместить вставки из родительского вектора в целевой вектор.

Резюме - клонирование против субклонирования

Клонирование создает генетически идентичные клетки или организмы со вставленным интересующим геном или ДНК. Он проходит через разделение и вставку интересующей ДНК в вектор и экспрессию внутри бактерии-хозяина. Субклонирование разделяет подобные шаги с клонированием. Однако при субклонировании уже клонированный фрагмент ДНК (представляющий интерес ген) вставляется в вектор и трансформируется в бактерию-хозяина. В этом ключевое различие между клонированием и субклонированием..

Ссылки

1. Лодиш, Харви. «Клонирование ДНК с помощью плазмидных векторов». Молекулярно-клеточная биология. 4-е издание. Национальная медицинская библиотека США, 1 января 1970 г. Веб. 05 марта 2017
2. «Субклонирование.» Wikipedia. Фонд Викимедиа, 14 февраля 2017 года. Интернет. 06 марта 2017
3. «Субклонирование.» Субклонирование | Статьи в открытом доступе | Журналы открытого доступа | Материалы конференции | Редакторы | Авторы | Рецензенты | научные события. Н.п., н.д. Web. 06 марта 2017
4. Wackerhage, Henning. «Как субклонировать.» Как субклонировать. Н.П., 1 января 1970 г. Веб. 06 марта 2017

Изображение предоставлено

1. Процедура молекулярного клонирования - CNX OpenStax [CC BY 4.0], через Wikimedia Commons
2. Процедура субклонирования - Автором оригинальной версии был Takometer из английской Википедии (перенесено из en.wikipedia в Commons.) [CC BY 2.5], через Wikimedia Commons