Разница между прямым и косвенным ИФА

Ключевая разница - прямой и косвенный ИФА
 

Иммуноферментный анализ (ИФА), также известный как иммуноферментный анализ, представляет собой серологический тест, который обнаруживает антитела в крови.. Он используется в качестве диагностического инструмента, чтобы выяснить, подвергался ли пациент воздействию определенного типа вируса или другого инфекционного агента (антигена), и вырабатывал ли организм антитела против инфекции. ИФА может также идентифицировать прошлые и текущие инфекции. Следовательно, ELISA часто используется в качестве предварительного скрининга врачами перед углубленным анализом заболеваний. Этот тест может быть выполнен в лаборатории путем взятия образца крови у пациента. Существует два типа теста ИФА: прямой ИФА и непрямой ИФА. Основное различие между прямым и непрямым ИФА заключается в том, что непрямой ИФА более чувствителен и требует добавления вторичного антитела пока прямой ИФА менее чувствителен и использует только первичное антитело.

СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое прямой ИФА
3. Что такое косвенный ИФА
4. Сравнение бок о бок - прямой и косвенный ИФА
5. Резюме

Что такое прямой ИФА?

ELISA - это диагностический тест заболевания, проводимый для выявления наличия определенных антигенов или антител в крови. Это делается в виде пластинчатого анализа. Он использует антитела, связанные с легко анализируемыми ферментами. Присутствие антигенов в образце сыворотки связывается со специфическими антителами, связанными с ферментами. На последнем этапе добавляют специфический субстрат для взаимодействия с ферментом. Фермент превращает субстрат в цветной или производящий сигнал продукт. Изменение цвета в химическом субстрате показывает наличие определенного антитела в образце сыворотки. Прямой тест ELISA использует только первичное антитело, связанное с ферментом. При связывании с антигеном он быстро меняет цвет, что указывает на наличие инфекционного агента в крови. Однако интенсивность сигналов слабее при прямом ИФА, так как эпитопы ограничены связыванием антигенов. Следовательно, прямой ИФА менее чувствителен по сравнению с косвенным ИФА.

Рисунок 01: Прямой тест ИФА

Что такое косвенный ИФА?

ELISA может быть выполнен с использованием двух типов антител, а именно; первичное антитело и вторичное антитело. Инструмент косвенного ИФА использует оба типа антител для усиления сигналов для лучшего обнаружения. Метод непрямого ИФА выполняется следующим образом.

1. Планшеты инкубируют с антигенами и промывают для блокирования неспецифического связывания.
2. Затем первичные антитела добавляются и промываются.
3. Фермент-связанное вторичное антитело добавляют и промывают.
4. Добавляют субстрат и позволяют реагировать с ферментами.
5. Сигналы обнаруживаются, и присутствие или отсутствие специфического антигена в образце идентифицируется.

В непрямом тесте ELISA несколько вторичных антител могут связываться с одним первичным антителом. Вторичные антитела связаны с легко анализируемыми ферментами. Поэтому одно связывание может давать сильный сигнал из-за более чем одного взаимодействия. Следовательно, непрямой ИФА более чувствителен, чем прямой ИФА. Однако непрямой ИФА может давать неспецифические сигналы из-за перекрестных реакций вторичных антител.

Рисунок 02: Косвенный тест ИФА

В чем разница между прямым и косвенным ИФА?

Прямой против косвенного ИФА
Прямой ИФА менее чувствителен по сравнению с косвенным ИФА.	Косвенный ИФА более чувствителен.
Затраченное время
Прямой тест ELISA - быстрый процесс.	Косвенный ИФА занимает много времени.
Использование антител
Только один тип антител (первичные антитела) используются в прямом ИФА.	Первичные и вторичные антитела используются для непрямого ИФА.
Связь с ферментами
Первичные антитела связаны с ферментами.	Вторичные антитела связаны с ферментами.
Перекрестная реактивность вторых антител
Прямой ИФА устраняет перекрестную реактивность вторых антител.	На непрямой ИФА влияет перекрестная реактивность вторых антител.
сигналы
Сигналы слабые по сравнению с непрямым ИФА.	Сигналы усиливаются при непрямом ИФА. Следовательно, это легко обнаружить.

Резюме - прямой и косвенный ИФА

ELISA - это биохимический метод, используемый в основном в иммунологии для обнаружения наличия антитела или антигена в образце крови пациента. Это может быть выполнено с помощью двух процессов, известных как прямой или косвенный ИФА. Прямой тест ELISA использует только первичные антитела для обнаружения антигена, в то время как непрямой ELISA использует как первичные, так и вторичные антитела. В прямом ELISA первичные антитела помечены, тогда как в непрямом ELISA вторичные антитела помечены. В этом разница между прямым и непрямым ИФА.

Ссылки
1. «Иммуноферментный анализ (ИФА)». Бюллетень Всемирной организации здравоохранения. Национальная медицинская библиотека США, 1976. Веб. 29 марта 2017
2. Лун, А. М ван, Дж. Т Ван Дер Логт, Ф. В. Хессен и Дж. Ван Дер Веен. «Энзим-связанный иммуносорбентный анализ, в котором используется меченый антиген для выявления антител иммуноглобулина М и А при токсоплазмозе: сравнение с непрямой иммунофлюоресценцией и двойным сэндвич-ферментным иммуноферментным анализом». Журнал клинической микробиологии. Национальная медицинская библиотека США, июнь 1983 года. Интернет. 29 марта 2017

Изображение предоставлено:
1. «Диаграмма ELISA» Кавитри - собственная работа (CC BY 3.0) через Commons Wikimedia 
2. «Косвенный ELISA» By Cawang - собственная работа (CC0) через Commons Wikimedia