Разница между тонким слоем бумаги и колоночной хроматографией

Ключевая разница - бумага против тонкого слоя против колонка хроматография
 

Бумажная хроматография, тонкослойная хроматография и колоночная хроматография - это три типа хроматографических методов. ключевое отличие между бумажной хроматографией, тонкослойной хроматографией и колоночной хроматографией основаны на типе стационарной фазы, используемой в методике хроматографии. Бумажная хроматография использует целлюлозную бумагу в качестве своей стационарной фазы, тонкослойная хроматография использует глинозем или силикагель в качестве своей стационарной фазы, в то время как колоночная хроматография использует колонку, заполненную подходящим матричным материалом в качестве ее стационарной фазы..

В процессе разделения и идентификации биомолекул, таких как белки и углеводы, хроматография является важным используемым биофизическим методом. Хроматография разделяет соединения на основе их растворимости, размера и заряда. Основываясь на механизме разделения, хроматография использует такие механизмы, как ионный обмен, поглощение, разделение и исключение по размеру, и существует три метода хроматографии; а именно бумага, тонкослойная и колоночная хроматография. Бумажная хроматография основана на адсорбции твердого вещества и растворимости соединения, и в качестве неподвижной фазы используется целлюлозная бумага. Тонкослойная хроматография основана на адсорбции молекул твердыми жидкостями. Он имеет стационарную фазу, которая обычно состоит из оксида алюминия или силикагеля, и подвижную фазу, которая является растворителем. Колоночная хроматография использует колонку, заполненную матрицей, которая используется для разделения молекул в основном на основе их размера, сродства или заряда..

СОДЕРЖАНИЕ

1. Обзор хроматографии и основные различия
2. Что такое бумажная хроматография
3. Что такое тонкослойная хроматография
4. Что такое колоночная хроматография
5. Сходство между бумагой, тонким слоем и колоночной хроматографией
6. Сравнение бок о бок - бумага с тонким слоем и хроматография в колонке
7. Резюме

Что такое бумажная хроматография?

Бумажная хроматография - это самый простой тип хроматографии, который не используется для обширных исследований. В основном он используется в студенческих лабораториях для определения биомолекул, таких как аминокислоты и углеводы, присутствующие в смесях. Бумажная хроматография использует стационарную фазу, которая производится с использованием целлюлозной бумаги или фильтровальной бумаги Whatman, и подвижную фазу, которая обычно готовится с использованием органических растворителей, таких как н-бутанол и т. Д. Стационарная фаза насыщается водой, в результате чего стационарная фаза становится жидкой. Таким образом, когда соединения обнаруживаются и им дают работать в присутствии подвижной фазы, в зависимости от растворимости соединений, они разделяются. Таким образом, при разработке хроматограммы можно провести окрашивание для определения длины каждого соединения. Таким образом, коэффициент удержания может быть рассчитан.

Рисунок 01: Бумажная хроматография

Бумажная хроматография может быть далее классифицирована как восходящая бумажная хроматография и нисходящая бумажная хроматография в зависимости от направления протекающего растворителя..

Что такое тонкослойная хроматография?

Тонкослойная хроматография или ТСХ является широко используемой техникой для идентификации различных аминокислот, присутствующих в смеси, или для идентификации белков. Техника разделения основана на адсорбции твердого тела и жидкости. Во время тонкослойной хроматографии в качестве неподвижной фазы используется пластина из оксида алюминия или силикагеля. Смесь растворителей варьируется в зависимости от потребности и может использовать различные комбинации органических соединений, таких как н-бутанол, уксусная кислота и вода, для приготовления растворителя. Соединения, подлежащие разделению, наносятся на пластину и погружаются в смесь растворителей. Как только растворитель движется вверх в зависимости от капиллярного действия, создаваемого пластиной, соединения, обнаруженные на пластине, также перемещаются в зависимости от их растворимости в растворителе..

Рисунок 02: Тонкослойная хроматография

Обнаружение пятен после проведения хроматограммы выполняется различными процедурами окрашивания. Некоторые используют окрашивание нингидрином, которое является довольно токсичным методом окрашивания. Современные тонкослойные хроматограммы используют флуоресцентные методы для просмотра хроматограммы после пробега. В зависимости от пройденного расстояния можно рассчитать время удерживания каждого соединения. Это может использоваться для идентификации типа соединения, разделенного на основе используемой смеси. ТСХ в основном используется для идентификации аминокислот в белковой смеси, а также для разделения различных типов моносахаридов, присутствующих в смеси.

Что такое колоночная хроматография?

Колоночная хроматография - это широкий термин, используемый для описания многих типов хроматографических методов, в которых используется метод разделения на колонке. В колоночной хроматографии используют физическую колонку с упаковочным материалом для разделения соединений. Разделение может основываться на различных физических свойствах, проявляемых соединениями. Этими свойствами могут быть заряд, размер, трехмерная конформация и способность к связыванию и т. Д. Таким образом, колонка, заполненная материалом матрицы, действует как неподвижная фаза, а промывочный буфер, применяемый к колонке, действует как подвижная фаза..

Если молекулы разделяются в зависимости от размера, упаковочный материал упаковывается таким образом, что он оставляет поры для прохождения соединений. Таким образом, более крупные молекулы, которые не могут протекать через поры, элюируются первыми, в то время как более мелким молекулам элюируется намного больше времени..

Рисунок 03: Колоночная хроматография

Если молекулы разделены на основе их заряда, стационарная фаза будет содержать анион или катионит, к которому соединения будут притягиваться на основе их заряда. Таким образом, на этапе промывки несвязанные соединения будут элюироваться. После добавления буфера для элюирования связанные заряженные соединения будут элюированы. Обнаружение этих элюентов в основном основано на спектрофотометрических методах..

Каковы сходства между тонким слоем бумаги и колоночной хроматографией?

• Для разделения биомолекул, таких как аминокислоты, белки и углеводы, используются три метода тонкослойной и колоночной хроматографии на бумаге..
• Методы тонкослойной и колоночной хроматографии на бумаге имеют подвижную фазу и стационарную фазу.
• Методы тонкослойной и колоночной хроматографии на бумаге используют биофизические механизмы для разделения.

В чем разница между тонким слоем бумаги и колоночной хроматографией?

Бумага против тонкого слоя против колоночной хроматографии
Бумажная хроматография	Бумажная хроматография - это хроматографический метод, используемый для разделения соединений на основе адсорбции жидкость-жидкость и растворимости соединения. Он использует целлюлозную бумагу в качестве своей стационарной фазы.
Тонкослойная хроматография	Тонкослойная хроматография - это еще один хроматографический метод, основанный на адсорбции молекул твердыми жидкостями. Он имеет стационарную фазу из глинозема или силикагеля и растворитель в качестве подвижной фазы, которая является растворителем.
Колоночная хроматография	Колоночная хроматография использует колонку, заполненную матрицей, которая используется для разделения молекул в основном на основе их размера, сродства или заряда..
Стационарная фаза
Бумажная хроматография	Бумага из нитроцеллюлозы Whatman используется в качестве стационарной фазы в бумажной хроматографии.
Тонкослойная хроматография	Глинозем или силикагель используют в качестве стационарной фазы тонкослойной хроматографии.
Колоночная хроматография	Колонку, заполненную подходящим упаковочным материалом, используют в качестве стационарной фазы в колоночной хроматографии..
Мобильная фаза
Бумажная хроматография	Текущий растворитель является подвижной фазой бумажной хроматографии.
Тонкослойная хроматография	Текущий растворитель - подвижная фаза тонкослойной хроматографии.
Колоночная хроматография	Промывочный буфер является подвижной фазой колоночной хроматографии.
Механизмы, используемые для разделения
Бумажная хроматография	Бумажная хроматография основана на абсорбции твердого вещества и жидкости..
Тонкослойная хроматография	Тонкослойная хроматография основана на абсорбции твердого вещества и жидкости..
Колоночная хроматография	Колоночная хроматография основана на исключении по размеру, заряде и форме.
Элюирующий буфер
Бумажная хроматография	Не требуется бумажной хроматографии.
Тонкослойная хроматография	Не требуется для тонкослойной хроматографии.
Колоночная хроматография	Требуется в колоночной хроматографии.
обнаружение
Бумажная хроматография	Окрашивание и определение коэффициента удерживания.
Тонкослойная хроматография	Окрашивание и определение коэффициента удерживания.
Колоночная хроматография	Спектрофотометрическое определение.

Резюме - Тонкий слой бумаги против колонка хроматография

Бумажная хроматография, ТСХ и колоночная хроматография - это методы разделения, используемые для разделения биомолекул, таких как белки, аминокислоты и углеводы (в основном, моносахариды). Бумажная хроматография использует целлюлозную бумагу в качестве стационарной фазы, а механизм разделения основан на адсорбции твердого вещества и жидкости. ТСХ также использует твердо-жидкостные адсорбционные механизмы. Молекулы разделяются на неподвижной фазе в зависимости от их растворимости в подвижной фазе. Колоночная хроматография использует физические свойства, такие как размер, форма, заряд и молекулярный вес соединения для разделения. Колонна, заполненная материалом матрицы, действует как стационарная фаза, тогда как промывочный буфер действует как фаза растворителя. В этом разница между тонким слоем бумаги и колоночной хроматографией.

Ссылка:

1. Кларк, Джим. «ХРОМАТОГРАФИЯ ТОНКОГО СЛОЯ» Тонкослойная хроматография, 2007. Доступно здесь 
2.Коскун, Озлем. «Техника разделения: хроматография». Северная клиника Стамбула, издательство Kare Publishing, 2016. Доступно здесь 

Изображение предоставлено:

1. «Хроматографический резервуар» (CC BY-SA 3.0) через Commons Wikimedia  
2. 'Последовательность Tlc', автором Quantockgoblin (Public Domain) через Википедию Commons
3. «Колоночная хроматография» (общественное достояние) через Commons Wikimedia