ПЦР против ПЦР в реальном времени
ПЦР или полимеразная цепная реакция - революционное открытие в современной молекулярной биологии, которое было впервые разработано химиком Кэри Маллисом в 1983 году. Оно позволяет амплифицировать единственную последовательность в сложной ДНК для анализа. Основная идея ПЦР состоит в том, что два праймера, которые комплементарны противоположным цепям последовательности ДНК, ориентированы друг на друга; праймеры образуют комплементарные цепи, каждая из которых содержит другой праймер. Следовательно, результатом является большое количество последовательности, соответствующей ДНК, которая лежит между двумя праймерами. Фермент ДНК-полимераза используется для удлинения праймеров в ПЦР. ДНК-полимераза является термостабильным ферментом и обладает способностью выживать при высоких температурах (от 94 до 95 ° C), используемых для денатурации матричной ДНК.
ПЦР включает три этапа, а именно: повторные циклы денатурации, отжиг праймеров и синтез ДНК. Для выполнения этой реакции используется термоциклер, который можно запрограммировать на быстрое и точное изменение температуры. Сфера применения ПЦР - уголовные расследования, выявление ДНК-отпечатков, обнаружение патогенов и анализ ДНК ранних видов человека..
Что такое обычная ПЦР?
Существует три основных этапа обычной ПЦР, а именно: Стадия амплификации ДНК, разделение ПЦР и обнаружение продуктов. Разделение сегментов ДНК обычно проводят с помощью электрофореза в агарозном геле. Затем продукты окрашивают этиловым бромидом. Наконец, обнаружение достигается путем визуализации полос на гелях в УФ-свете. Таким образом, окончательные результаты обычной ПЦР не выражены в виде чисел. Обычно обычная ПЦР способна обнаружить только один параметр.
Что такое ПЦР в реальном времени?
ПЦР в реальном времени может обнаружить амплификацию продуктов, поскольку продукты синтезируются. С развитием технологии, ПЦР стал очень популярным методом, особенно для обнаружения и идентификации бактерий в пищевых продуктах. ПЦР в реальном времени использует систему флуоресцентного красителя и термоциклера, оснащенные способностью флуоресцентного обнаружения.
В чем разница между обычной ПЦР и ПЦР в реальном времени?
• Обычная ПЦР занимает больше времени, так как она использует гель-электрофорез для анализа продуктов амплифицированной ПЦР. Напротив, ПЦР в реальном времени занимает меньше времени, поскольку она может обнаружить амплификации во время ранних фаз реакции.
• ПЦР в реальном времени собирает данные в фазе экспоненциального роста ПЦР, в то время как традиционная ПЦР собирает данные в конечной точке реакции.
• Результаты конечной точки обычной ПЦР могут быть не очень точными, но результаты ПЦР в реальном времени очень точны.
• ПЦР в реальном времени более чувствительна, чем обычная ПЦР.
• Обычная ПЦР имеет очень низкое разрешение, в то время как ПЦР в реальном времени может обнаружить очень небольшие изменения из-за высокого разрешения.
• Обнаружение конечной точки обычной ПЦР имеет короткий динамический диапазон, тогда как обнаружение ПЦР в реальном времени имеет широкий динамический диапазон.
• В отличие от обычной ПЦР, методы автоматического обнаружения обнаруживаются в ПЦР в реальном времени..
• Обычная ПЦР очень сложна и трудоемка больше, чем ПЦР в реальном времени.
• В отличие от ПЦР в реальном времени, обычная ПЦР не может различать мертвые и живые бактерии.
• ПЦР в реальном времени использует систему флуоресцентного красителя для обнаружения продуктов, в то время как обычная ПЦР использует бромид этидия и ультрафиолетовый свет для визуализации полос в агарозной гелевой среде..