Разница между SDS Page и Вестерн-блоттингом

Ключевая разница - SDS Page против Western Blot
 

Вестерн-блоттинг - это метод, который обнаруживает определенный белок из образца белка. Этот метод выполняется в несколько ключевых этапов: гель-электрофорез, блоттинг и гибридизация.. Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS Page) - это своего рода метод гель-электрофореза, который используется для разделения белков в соответствии с их размерами (молекулярными массами). Вестерн-блоттинг - это специальный лист промокательной мембраны, который используется для передачи того же рисунка белков на странице SDS. Ключевое различие между SDS Page и вестерн-блоттингом заключается в том, что SDS Page позволяет разделять белки в смеси пока Вестерн-блот позволяет обнаруживать и количественно определять конкретный белок из смеси. Оба полезны в исследованиях анализа белка.

СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое SDS Page
3. Что такое вестерн-блот
4. Сравнение бок о бок - страница SDS против вестерн-блоттинга
5. Резюме

Что такое SDS Page?

SDS Page - это метод гель-электрофореза, используемый для разделения белков. Он широко используется в биохимии, генетике, криминалистике и молекулярной биологии. Как только белки извлечены из образца, их наносят на гель, состоящий из SDS и полиакриламида. SDS представляет собой анионный детергент, который используется для линеаризации белков (денатурированных белков) и для придания линеаризованных белков отрицательного заряда, пропорционального их молекулярной массе. Полиакриламид становится твердой подложкой для геля. Денатурированные белки с отрицательным зарядом мигрируют в направлении положительного конца аппарата через гель. В зависимости от размеров белков, скорость миграции различается между белками и происходит разделение. Поэтому SDS-страница полезна для разделения отдельных белков в зависимости от их размеров..

Приготовление полиакриламидного геля для фракционирования белков является важным этапом в SDS. Правильная концентрация полиакриламида и тип используемого сшивающего агента сильно влияют на физические свойства геля, что обеспечивает фактическое разделение различных белков. Размеры пор геля должны должным образом управляться для эффективного разделения. Однако SDS Page рассматривается как метод разделения белков с высоким разрешением.

Техника SDS Page имеет серьезные ограничения в анализе белков. Поскольку SDS денатурирует белки перед разделением, это не позволяет определять ферментативную активность, белковые связывающие взаимодействия, кофакторы белка и т. Д..

Рисунок 01: Страница SDS

Что такое вестерн-блот?

Метод вестерн-блоттинга позволяет определять специфический белок из белковой смеси и измерять количество и молекулярную массу белка. Вестерн-блоттинг - это мембрана, используемая во время процедуры блоттинга для получения зеркального отображения белковых рисунков в SDS-полиакриламидном геле. Мембрана, которая используется для вестерн-блоттинга, в основном состоит из нитроцеллюлозы или поливинилидендифторида (PVDF). Мембрана с перенесенным белком может быть использована для идентификации желаемого белка. Требуется высококачественное антитело для обнаружения желаемого белка путем гибридизации. Антитело связывается со своим специфическим антигеном и обнаруживает присутствие желаемого антигена, который представляет собой белок.

Перенос белков из полиакриламидного геля SDS в вестерн-блоттинг осуществляется электроблоттингом. Это эффективный и быстрый метод, который вызывает электрофорез белков из геля и их передачу на нитроцеллюлозную мембрану (вестерн-блот).

Рисунок 02: Вестерн-блот

В чем разница между SDS Page и Western Blot??

SDS Page против Вестерн-блоттинга
SDS Page - метод гель-электрофореза.	Вестерн-блоттинг - это метод, который проводится на мембране для обнаружения специфического белка из смеси..
использование
Страница SDS позволяет разделять белки в соответствии с их размерами.	Вестерн-блоттинг позволяет переносить белки на геле SDS-страницы без изменения его структуры и позволяет гибридизоваться со специфическими антителами..
Недостатки
Недостаток этой методики - денатурация белка, высокая стоимость и наличие нейротоксиновых химических веществ..	Эта техника отнимает много времени и требует хорошего личного опыта и конкретных контролируемых условий..

Резюме - SDS Page против Western Blot

SDS Page и вестерн-блоттинг - два метода анализа белка. SDS Page позволяет легко разделять белки на геле в зависимости от их молекулярной массы. Вестерн-блоттинг помогает подтвердить наличие и количество определенного белка путем гибридизации со специфическими антителами. В этом разница между SDS Page и вестерн-блоттингом.

Ссылки:
1. Бланчер, C. и А. Джонс. «SDS -PAGE и вестерн-блоттинг». Методы молекулярной медицины. Национальная медицинская библиотека США, н.д. Web. 27 марта 2017
2. Новаковски, Эндрю Б., Уильям Дж. Вобиг и Дэвид Х. Петеринг. «Native SDS-PAGE: электрофоретическое разделение белков с высоким разрешением с сохранением нативных свойств, включая ионы связанных металлов». Металломика: интегрированная биометаллика. Национальная медицинская библиотека США, май 2014 г. Интернет. 27 марта 2017.

Изображение предоставлено:
1. «Электрофорез в SDS-PAGE». Автор Bensaccount из английский Википедия (CC BY 3.0) через Commons Wikimedia
2. «Вестерн-блот 114А» от Amanthabagdon - собственная работа (общественное достояние) через Commons Wikimedia