Разница между SYBR Грин и Такман

Ключевая разница - SYBR Грин против Такмана
 

SYBR Green и Taqman - два метода, используемые для обнаружения или наблюдения за процессом амплификации ПЦР в реальном времени. SYBR Green - это метод, основанный на использовании интеркалирующего красителя, окрашивающего нуклеиновую кислоту, а Taqman - метод, основанный на гидролизном зонде. Обе технологии предназначены для генерации флуоресценции во время ПЦР, что позволяет машине ПЦР в реальном времени отслеживать реакцию в режиме «реального времени».. Метод SYBR Green проводится с использованием флуоресцентного красителя, называемого SYBR green, и обнаруживает амплификацию, связывая краситель с продуцированной двухцепочечной ДНК. Taqman проводится с использованием зондов с двойной меткой и обнаруживает амплификацию путем деградации зонда Taq-полимеразой и выделения флуорофора.. В этом ключевое отличие SYBR Green от Taqman..

СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое SYBR Green?
3. Что такое Такман
4. Сравнение бок о бок - СИБР Грин против Такмана
5. Резюме

Что такое SYBR Green?

SYBR Green - флуоресцентный краситель, используемый для окрашивания нуклеиновых кислот, особенно двухцепочечной ДНК в молекулярной биологии. Метод SYBR Green используется для количественной оценки продуктов ПЦР во время ПЦР в реальном времени. Как только он связывается с ДНК, полученный комплекс ДНК-краситель поглощает синий свет и излучает интенсивный зеленый свет. Это происходит из-за структурных изменений, которые происходят в молекуле красителя при связывании с двухцепочечной ДНК. Когда ПЦР создает все больше и больше ДНК, все больше молекул красителя связывается с ДНК, создавая больше флуоресценции. Следовательно, флуоресценция увеличивается с накоплением продукта ПЦР. Следовательно, количество продукта ПЦР можно количественно измерить с помощью определения флуоресценции SYBR Green..

Зеленый краситель SYBR также можно использовать для маркировки ДНК в цитометрии и флуоресцентной микроскопии. Бромид этидия был успешно заменен SYBR Green, поскольку бромид этидия является канцерогенным красителем с проблемами утилизации во время визуализации ДНК в гель-электрофорезе..

Есть преимущества и недостатки зеленого метода SYBR. Этот метод очень чувствителен, недорог и прост в использовании. Однако из-за его способности связываться с любой двухцепочечной ДНК, неспецифическое связывание может привести к чрезмерной количественной оценке продукта ПЦР..

Рисунок 01: Зеленая техника SYBR

Что такое Такман?

Taqman - это альтернативный метод SYBR Green для мониторинга процесса ПЦР в реальном времени. Этот метод зависит от 5 '- 3' экзонуклеазной активности фермента Taq-полимеразы в отношении деградации зондов во время удлинения новой цепи и выделения флуорофора. Двойные меченые зонды используются в этом методе, и он основан на гидролизе зондов. Зонды представляют собой флуоресцентно меченные ДНК-олигонуклеотиды, имеющие флуоресцентную репортерную молекулу (флуорофор) на 5'-конце и молекулу-гаситель на 3'-конце. Они предназначены для связывания с одноцепочечным шаблоном на противоположной стороне отжига грунтовки. Taq-полимераза добавляет нуклеотиды к праймеру и расширяет новую цепь в направлении двойных меченых зондов. Как только Taq-полимераза встречается с зондом, экзонуклеазное действие Taq-полимеразы активирует и разрушает зонд. Как только он завершает синтез новой нити, зонд подвергается полной деградации и высвобождению флуорофора. Выделение флуорофора генерирует флуоресценцию. Молекула флуоресцентного гасителя эффективно гасит излучаемый свет и создает выход для количественного определения продукта ПЦР. Выход флуорофоров и количество продуктов ПЦР пропорциональны. Следовательно, количественное определение может быть легко выполнено методом Такмана.

Рисунок 02: Метод Такмана

Метод Такмана используется в ПЦР в реальном времени, количественной оценке экспрессии генов, обнаружении генетических полиморфизмов, количественной оценке делеций хромосомной ДНК, идентификации бактерий, проверке анализа микрочипов, генотипировании SNP и т. Д..

В чем разница между SYBR зеленый и Такман?

SYBR Грин против Такмана
SYBR Green на основе ДНК-связывающего красителя.	Taqman зависит от зондов гибридизации и от 5 'до 3' экзонуклеазной активности Taq-полимеразы..
Флуоресцентно маркированные зонды
Никаких флуоресцентно-меченных зондов не требуется.	Требуются датчики с двойной маркировкой.
Мультиплексный анализ генов
Не может использоваться для мультиплексных генных целей.	Может использоваться для мультиплексных генных мишеней.
Стоимость
Это дешевле.	Это дороже.
специфичность
Это менее специфично и связывается с любой двухцепочечной ДНК	Они очень специфичны, так как зонды обнаруживают специфические продукты амплификации.
эффективность
Это менее эффективно.	Это очень эффективно.
заявка
Это используется в ПЦР в реальном времени, визуализации в агарозном геле, маркировке ДНК и т. Д..	Это используется в ПЦР в реальном времени, для количественной оценки экспрессии генов, выявления генетических полиморфизмов и т. Д..

Основная информация - СИБР Грин и Такман

Taqman и SYBR green - два метода, используемые в ПЦР в реальном времени (количественная ПЦР). Оба метода обеспечивают эффективное количественное определение продукта ПЦР и основаны на испускании флуоресценции. В методе Такмана используются датчики с двойной меткой для обнаружения накопленной ДНК, а в методе SYBR Green используется флуоресцентный краситель. Оба эти метода также имеют различные применения в молекулярной биологии.

Ссылка:
1. Таджадини, Мохамад Хасан, Моджтаба Панджепур и Шахайх Хаджуй Джаванмард. «Сравнение методов SYBR Green и TaqMan в количественном анализе полимеразной цепной реакции в реальном времени для четырех подтипов аденозиновых рецепторов». Расширенные биомедицинские исследования. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, 2014. Веб. 13 марта 2017.
2. «Основные принципы ПЦР в реальном времени». ПЦР в реальном времени, Количественный (КПЦР), Primers & Mastermix: Primerdesign Ltd. N.p., n.d. Web. 13 марта 2017.
3. «SYBR Green и другие ПЦР-красители в реальном времени». Biocompare. Н.П., 05.04.2010. Веб. 14 марта 2017

Изображение предоставлено:
1. «ПЦР с SYBR зеленым». By -Ygonaar 23:09, 7 марта 2006 г. (UTC) - это график, созданный Ygonaar с Power Point, CC BY-SA 3.0, https://commons.wikimedia.org/w/ index.php? curid = 619528
2. «Taqman» от пользователя: Braindamaged - собственная работа (общественное достояние) через Commons Wikimedia