Векторы используются в молекулярном клонировании. Вектор может быть определен как молекула ДНК, которая ведет себя как средство переноса чужеродного генетического материала в другую клетку. Вектор, содержащий чужеродную ДНК, известен как рекомбинантная ДНК, и он должен обладать способностью реплицировать и экспрессировать ее в организме хозяина.. Дрожжевая искусственная хромосома (YAC) и бактериальная искусственная хромосома (BAC) два типа векторов, участвующих в клонировании. Ключевое различие между YAC и BAC в том, что YAC - это искусственно сконструированная векторная система, использующая специфическую область дрожжевой хромосомы для вставки больших сегментов генетического материала в клетки дрожжей пока BAC - это искусственно построенная векторная система, использующая определенную область Кишечная палочка хромосома, чтобы вставить большие сегменты ДНК в Кишечная палочка ячейки.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое векторы YAC
3. Что такое векторы BAC
4. Сравнение бок о бок - векторы YAC и BAC
5. Резюме
YAC (дрожжевая искусственная хромосома) - это искусственно созданная хромосома, способная нести большой сегмент чужеродной ДНК и реплицироваться в клетках дрожжей. Он имеет центромеры, теломеры, а также автономно реплицирующиеся последовательности, которые необходимы для репликации и стабильности. YAC также должен иметь селективный маркер или маркеры и сайты рестрикции, чтобы сделать его эффективным вектором клонирования. Большая последовательность в диапазоне от 1000 до 2000 кб может быть вставлена в YAC и перенесена в дрожжи. Эффективность преобразования YAC очень низкая.
Рисунок 01: Вектор YAC
Бактериальная искусственная хромосома (BAC) - это искусственно сконструированная хромосома для молекулярного клонирования. У этого есть определенные области Кишечная палочка F плазмида и она круглая и супер спиральная. BAC разработан для клонирования фрагментов ДНК в бактерии, особенно для Кишечная палочка. Может содержать фрагменты ДНК размером до 300 кб. По сравнению с YAC, вставки для клонирования BAC имеют меньшие размеры. ВАС были разработаны в 1992 году и до сих пор популярны благодаря своей стабильности и простоте конструкции. BAC также полезны при разработке вакцин.
Рисунок 02: Вектор BAC в молекулярном клонировании
YAC против BAC Векторы | |
YAC является генно-инженерной хромосомой с использованием дрожжевой ДНК с целью клонирования. | BAC - это генетически сконструированная молекула ДНК, использующая Кишечная палочка ДНК с целью клонирования. |
Пол | |
YAC были разработаны для клонирования больших фрагментов геномной ДНК в дрожжи. | ВАС были разработаны для клонирования больших геномных фрагментов в Escherichia coli. |
Длина вставки | |
YAC могут содержать геномные вставки размером с мегабазу (1000 кб - 2000 кб). | BAC могут нести вставки размером 200-300 кб или меньше. |
строительство | |
ДНК YAC трудно очистить неповрежденными и требует высокой концентрации для создания векторной системы YAC. | BAC легко очистить неповрежденным и может быть легко построен. |
химеризм | |
YACs часто химерны. | BAC редко бывают химерными. |
стабильность | |
YAC нестабилен. | BAC стабильный. |
изменения | |
Дрожжевая рекомбинация очень выполнима и всегда остается активной. Следовательно, он может генерировать удаления и другие перестановки в YAC. | Кишечная палочка рекомбинация предотвращается и включается при необходимости. Следовательно, это уменьшает нежелательные перестановки в BAC. |
техническое обслуживание | |
Манипулирование рекомбинантными YAC обычно требует переноса YAC в Кишечная палочка для последующих манипуляций. Следовательно, это трудоемкий процесс. | Модификация BAC происходит непосредственно в Кишечная палочка. Таким образом, нет необходимости в переносе ДНК. Следовательно, процесс не является трудоемким. |
YAC стал важным инструментом исследования процессов клонирования благодаря своей способности клонировать большие фрагменты ДНК в организм хозяина. Однако у YAC есть несколько недостатков, таких как векторы, такие как трудности строительства, химеризм, нестабильность и т. Д. Поэтому, чтобы преодолеть эти проблемы, ученые разработали векторы BAC. БАК был построен с использованием конкретных регионов Кишечная палочка хромосома. Это устойчивый вектор, и его легко построить. Однако длина ДНК, с которой может работать BAC, в 20 раз меньше, чем у YAC. В этом разница между векторными системами YAC и BAC. В настоящее время BAC является более предпочтительным, чем YAC в лабораториях..
Ссылки
1. Shero, J. H., M.K. McCormick, S.E. Antonarakis и P.Hieter. «Дрожжевые векторы искусственных хромосом для эффективной манипуляции с клонами и картирования». Genomics.U.S. Национальная медицинская библиотека, июнь 1991 года. Интернет. 25 марта 2017
2. Рамсей М. Дрожжевое клонирование искусственной хромосомы. Молекулярная биотехнология. Национальная медицинская библиотека США, апрель 1994 г. Интернет. 25 марта 2017
Изображение предоставлено:
1. «Клонирование векторов ВАС Chem114A» Тинастелла - (CC BY-SA 3.0) через Commons Wikimedia